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小鼠原代結(jié)腸成纖維細(xì)胞對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法
點擊次數(shù):1218 更新時間:2022-07-06

小鼠原代結(jié)腸成纖維細(xì)胞對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:


1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。


2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。


3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。


4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。


對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:


方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。


方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。


小鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞 細(xì)胞凍存


待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行小鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞|細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量yi酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。


小鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞 細(xì)胞復(fù)蘇的原則


快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使小鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞|細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對細(xì)胞造成損害。


 


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