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Folin-酚法測定蛋白質含量實驗方法
點擊次數:1277 更新時間:2017-02-16

Folin-酚法測定蛋白質含量實驗方法
實驗室較多用用Folin-酚法測定蛋白質含量,肺表面活性物質相關蛋白CElisa試劑盒此法的特點是靈敏度高,較雙縮脲高兩個數量級,較紫外法略高,操作稍微麻煩,反應約在15分鐘有zui大顯色,并zui少可穩定幾個小時,其不足之處是干擾因素較多,有較多種類的物質都會影響測定結果的準確性。
【原 理】
蛋白質中含有酚基的,可與酚試劑中的磷鉬鎢酸作用產生蘭色化合物,顏色深淺與蛋白含量成正比。
【操 作】
1、標準曲線的制備:
按下表操作,在試管中分別加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml蛋白標準溶液,用生理鹽水補足到1ml。肺表面活性物質相關蛋白CElisa試劑盒加入5ml的堿性酮試劑,混勻后室溫放置20分鐘后,再加入0.5ml酚試劑混勻。
編 號 1 2 3 4 5 6 蛋白標準(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.9% NaCl(ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 堿性酮試劑(ml) 5 5 5 5 5 5 混勻后室溫(25℃)放置20分鐘 酚試劑(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 30分鐘后,以第1管為空白,在650nm波長比色,讀出吸光度,以各客的標準蛋白濃度為橫坐標,以其吸光度為縱坐標繪出標準曲線。
2、血清蛋白質測定。
稀釋血清(或其它蛋白樣品濃度):準確吸取0.1ml血清,置于50ml容量瓶中,用生理鹽水釋釋至刻度(此為稀釋500倍,其它蛋白樣品酌情而定)。再取三只試管,分別標以1、2、3號,按下表操作:
編 號 測定管 標準管 空白管 稀釋標本(ml) 0.2 — — 稀釋標準液(ml) — 0.2 — 0.9%NaCl(ml) — — 0.2 堿性酮液(ml) 1.0 1.0 1.0 混勻后于室溫放置20分鐘 酚試劑(ml) 0.1 0.1 0.1
混勻各管,30分鐘后,在波長650nm比色,讀取吸光度。
【計 算】
1、以測定管讀數查找標準曲線求得血清蛋白含量。
2、無標準曲線時,肺表面活性物質相關蛋白CElisa試劑盒可以與測定管同樣操作的標準管按下式計算蛋白含量。

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