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淺析E2檢測ELISA試劑盒基礎(chǔ)小知識(shí)
點(diǎn)擊次數(shù):1160 更新時(shí)間:2019-12-28
   淺析E2檢測ELISA試劑盒基礎(chǔ)小知識(shí)
  E2檢測ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法
  1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
  2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
  3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
  5.  保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
  操作注意事項(xiàng)
  1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
  2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
  3.  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液即可視為陰性對(duì)照或者空白;預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
  4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
  5.  所有液體組分使用前充分搖勻。
  E2檢測ELISA試劑盒操作步驟
  1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
  3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
  4.  隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
  6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.  E2檢測ELISA試劑盒每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
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