產(chǎn)品名稱：重組人粒細胞集落刺激因子（G-CSF）
產(chǎn)品特點：重組人粒細胞集落刺激因子（G-CSF）的相關(guān)產(chǎn)品：FOXJ1/HFH-4 peptide 插頭蛋白J1抗原 0.5mgFOXJ1/HFH-4 peptide 插頭蛋白J1抗原GPX7 Protein Human 重組人 GPX7 / Glutathione Peroxidase 7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)SEMA4D重組大鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 P
產(chǎn)品型號：
更新日期：2024-11-19
訪問次數(shù)：501
重組人粒細胞集落刺激因子（G-CSF）的詳細資料：
產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱：Human G-CSF Protein
產(chǎn)品中文名稱：重組人粒細胞集落刺激因子（G-CSF）
規(guī)格：10 μg/50 μg/500 μg
貨號：EY-01X8669
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
標(biāo)簽:無標(biāo)簽
表達宿主:大腸桿菌
種屬:人
序列:氨基酸序列來源于：人源 G-CSF（Thr31-Pro204）表達的蛋白片段。
活性:通過其誘導(dǎo)M-NFS-60細胞增殖的能力來測定。該效應(yīng)的ED50為0.2569 ng/mL。
蛋白長度：重組人粒細胞集落刺激因子由174個氨基酸組成，在N端有一個Met標(biāo)簽，預(yù)測分子質(zhì)量為 18.7 kDa。
純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測
采用 LAL 法檢測，每 1 μg 蛋白質(zhì)中的 EU 含量小于 1.0。
產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的 PB動?動
背景
粒細胞集落刺激因子（G-CSF）是 CSF 系列糖蛋白中的一種，可調(diào)節(jié)造血細胞的增殖、分化和功能。它是一種關(guān)鍵的細胞因子，參與中性粒細胞的生成，并刺激造血祖細胞形成粒細胞集落（Metcalf 和 Nicola）。G-CSF 可產(chǎn)生一系列效應(yīng)，包括一過性減少 SDF-1 的表達、激活能裂解 VCAM-1 的金屬蛋白酶、從交感神經(jīng)系統(tǒng)釋放，從而導(dǎo)致造血干細胞從骨髓釋放或動員到外周。
本產(chǎn)品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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LIFR Protein Rat 重組大鼠 LIFR 蛋白 (His 標(biāo)簽)
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構(gòu)建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導(dǎo)表達
1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
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