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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人結(jié)腸癌組織源分離自患有結(jié)腸癌病人的結(jié)腸癌組織；結(jié)腸癌是常見的發(fā)生于結(jié)腸部位的消化道惡性腫瘤，好發(fā)于直腸與乙狀結(jié)腸交界處，以40～50歲年齡組發(fā)病率高，男女之比為2～3：1。發(fā)病率占胃腸道腫瘤的第3位。結(jié)腸癌主要為腺癌、黏液腺癌、未分化癌。大體形態(tài)呈息肉狀、潰瘍型等。結(jié)腸癌可沿腸壁環(huán)行發(fā)展，沿腸管縱徑上下蔓延或向腸壁深層浸潤(rùn)，除經(jīng)淋巴管、血流轉(zhuǎn)移和局部侵犯外，還可向腹腔內(nèi)種植或沿縫線、切口面擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。慢性結(jié)腸炎患者、結(jié)腸息肉患者、男性肥胖者等為易感人群。人結(jié)腸癌組織源不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學(xué)研究等，還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。人結(jié)腸癌組織源在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有不可替代性作用。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的癌組織源采用膠原酶消化、經(jīng)Percoll離心純化制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人結(jié)腸癌組織源經(jīng)檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豬肌球蛋白輕鏈0酸酶(MLCP)ELISA 試劑盒

Neuroophic factor glial cell line derived (GDNF) ELISA Kit 人膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)檢測(cè)試劑盒

Porcineacetylcholine,ACHELISAKit 豬乙酰(ACh)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlphaNAG(MouseAlphaN-acetylglucosaminidase)ELISAKit小鼠αN已酰氨基葡糖苷酶

血液離子(K)濃度化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

PlaIndole-3-aceticacid,IAAELISAKit植物吲哚乙酸(IAA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PEPT1 (Peptide-transporters 1 0.5mgPEPT1 (Peptide-transporters 1) 腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)多肽

DCN重組人 Decorin / DCN / SLRR1B 蛋白 Protein

CGB5 Protein Human 重組人 CGB5 蛋白

CD34 Protein Human 重組人 CD34 蛋白

PEPT1 (Peptide-transporters 1 0.5mgPEPT1 (Peptide-transporters 1) 腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)多肽

CGB5 Protein Human 重組人 CGB5 蛋白

HA重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

CD34 Protein Human 重組人 CD34 蛋白

DCN重組人 Decorin / DCN / SLRR1B 蛋白 Protein

小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human melatonin sulfate (MS) ELISA Kit 人褪黑色素(MS)檢測(cè)試劑盒

HumanLipoarabinomannan,LAMELISAKit 人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Chickeni-iodothyronine,T3檢測(cè)試劑盒雞三甲狀腺原(T3)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞TNFALPHA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次

MouseEsiol,E3ELISAKit小鼠雌三醇(E3)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人結(jié)腸癌組織源細(xì)胞小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠糖原合成酶激酶(GSK)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。